在ELISA實驗中,設置陽性對照和陰性對照是確保實驗準確性和可靠性的關鍵步驟。以下是如何設置這兩種對照的方法:
陽性對照(Positive Control):
- 陽性對照是已知含有目標分析物的樣本。它用于證明試劑盒的靈敏度和反應系統的有效性。通常使用濃度已知的純化抗原或包含高水平目標分析物的臨床樣本作為陽性對照。
陰性對照(Negative Control):
- 陰性對照是不含目標分析物的樣本。它用于確保實驗中沒有非特異性結合或污染。陰性對照通常使用未經處理的細胞培養基、純化水或來自未感染個體的樣本。
具體設置方法如下:
1. 準備對照樣本:
- 從試劑盒中獲取陽性對照樣本,或者根據實驗需要準備含有目標分析物的樣本。
- 同時準備陰性對照樣本,確保其不含有目標分析物。
2. 添加對照樣本到ELISA板孔:
- 按照試劑盒說明書的要求,將陽性對照樣本和陰性對照樣本分別加入到指定的板孔中。
- 確保加樣量準確無誤。
3. 運行ELISA實驗:
- 按照試劑盒的操作步驟進行抗體孵育、洗滌、底物添加等步驟。
- 在整個過程中,陽性對照和陰性對照應與待測樣本同時處理。
4. 讀數和數據分析:
- 使用酶標儀讀取陽性對照和陰性對照的吸光度值(OD值)。
- 分析陽性對照的OD值應顯著高于陰性對照,表明試劑盒工作正常。
- 對于待測樣本,其OD值應介于陽性對照和陰性對照之間,以區分陽性和陰性結果。
通過設置陽性對照和陰性對照,可以有效監控ELISA實驗的性能,并確保實驗結果的準確性。在實驗報告中,應詳細記錄對照樣本的信息和結果,以供后續分析和驗證。