ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種用于檢測抗原或抗體在樣品中的存在與濃度的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)。該方法基于抗原與抗體之間的特異性結(jié)合,并利用酶催化的顏色反應(yīng)來進(jìn)行定量分析。
ELISA檢測原理:
1. 固定化:將抗體或抗原固定在微孔板的孔壁上。
2. 阻斷:用不含目標(biāo)分析物的溶液處理孔,以防止非特異性結(jié)合。
3. 樣本添加:加入含有待測抗原或抗體的樣品,如果樣品中含有目標(biāo)分析物,它會(huì)與固定化的抗體或抗原結(jié)合。
4. 檢測抗體/抗原添加:加入標(biāo)記有酶的抗體,該抗體能夠識(shí)別并結(jié)合到已固定化的分析物或樣品中的分析物。
5. 洗滌:去除未結(jié)合的檢測抗體/抗原,減少背景信號(hào)。
6. 底物添加:加入可被酶催化轉(zhuǎn)化成有色產(chǎn)物的底物。
7. 停反應(yīng):在適當(dāng)時(shí)間后加入停止液,終止顏色反應(yīng)。
8. 讀數(shù):使用酶標(biāo)儀讀取各孔的吸光度值,通過對(duì)比已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中目標(biāo)分析物的濃度。
ELISA的實(shí)踐應(yīng)用非常廣泛,包括但不限于:
- 傳染病診斷:如HIV、乙肝、丙肝病毒感染等。
- 食品安全檢測:檢測食品中的激素殘留、致病菌、過敏原等。
- 藥物監(jiān)測:檢測血液中的藥物濃度,用于臨床治療監(jiān)控。
- 生物標(biāo)志物測定:在疾病診斷、預(yù)后評(píng)估以及治療效果監(jiān)測中,檢測與特定疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物。
- 農(nóng)業(yè):檢測植物疾病、農(nóng)藥殘留等。
為了確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和重復(fù)性,執(zhí)行ELISA時(shí)必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,包括樣品處理、反應(yīng)時(shí)間、溫度控制以及數(shù)據(jù)分析等步驟。
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