ELISA(酶聯免疫吸附實驗)是一種常用的生物化學技術,用于檢測特定抗原或抗體在樣品中的濃度。以下是 ELISA 實驗的詳細操作步驟:
1. 準備好所需的試劑和器材,包括抗原或抗體、酶標記的二抗、洗滌液、底物溶液、終止液、酶標儀等。
2. 按照實驗設計將抗原或抗體吸附在微孔板上的聚合物上。通常是將抗原或抗體溶液浸泡在微孔板中,并在 4℃過夜。
3. 洗滌微孔板,去除未結合的抗原或抗體。通常使用洗滌液進行多次洗滌。
4. 加入酶標記的二抗,讓其在室溫下與微孔板中的抗原或抗體結合。通常孵育 30 分鐘到 1 小時。
5. 再次洗滌微孔板,去除未結合的酶標記二抗。
6. 加入底物溶液,讓其在酶標記二抗的存在下轉化為有色產物。通常孵育 30 分鐘到 1 小時。
7. 加入終止液,終止底物反應。通常是一種硫酸鹽溶液,可以使有色產物不再生成。
8. 讀取微孔板中的吸光度值,使用酶標儀測定。吸光度值與抗原或抗體的濃度成正比。
9. 繪制標準曲線,根據吸光度值計算出抗原或抗體的濃度。
注意:ELISA 實驗的操作步驟可能因不同的抗原或抗體、實驗目的和實驗條件而略有不同。此外,實驗過程中需要注意衛生,避免污染。
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